Ph.D. mahasiswa Shloka Negi menganalisis data pengurutan yang telah lama dibaca di lab Computational Genomics UC Santa Cruz. Kredit: Shloka Negi, Universitas California – Santa Cruz
Satu dari setiap 10 orang di seluruh dunia terkena penyakit genetik langka, namun sekitar 50% dari mereka tetap tidak terdiagnosis meskipun ada kemajuan pesat dalam teknologi dan pengujian genetik. Bahkan ketika seseorang memiliki akses terhadap tes, proses mendapatkan diagnosis dapat memakan waktu sekitar lima tahun atau lebih, yang terkadang terlambat bagi pasien, yang seringkali adalah anak-anak, untuk memulai pengobatan yang tepat.
Hal ini disebabkan karena pengujian klinis saat ini menggunakan metode yang disebut short-read sequencing, yang tidak dapat mengakses informasi di wilayah genom tertentu sehingga mungkin kehilangan bukti penting untuk membantu membuat diagnosis.
Namun para peneliti UC Santa Cruz mendorong penelitian mengenai metode alternatif mutakhir, yang disebut long-read sequencing, yang dapat memberikan kumpulan data yang lebih komprehensif untuk menemukan variasi, menghilangkan kebutuhan akan beberapa tes khusus, dan menyederhanakan diagnosis penyakit langka.
Sebuah studi baru menunjukkan bahwa pengurutan jangka panjang berpotensi meningkatkan laju diagnosis sekaligus mengurangi waktu diagnosis dari tahun ke hari—dalam satu tes dan dengan biaya yang jauh lebih rendah.
Studi ini dipublikasikan di The American Journal of Human Genetics dan dipimpin oleh anggota inti dari UCSC Genomics Institute, Profesor Teknik Biomolekuler (BME) Benedict Paten dan Associate Professor BME Karen Miga, serta mantan sarjana pascadoktoral UCSC Jean Monlong.
“Penyakit langka adalah penyakit yang sulit didiagnosis selama bertahun-tahun, dan jika kita memiliki teknologi pengurutan yang menyederhanakan pengujian diagnostik, saya pikir itu akan memberikan kontribusi yang besar—dan itulah yang kami uji sebagai bagian dari makalah ini. kata Shloka Negi, Ph.D. UC Santa Cruz BME. siswa yang merupakan penulis pertama makalah tersebut.
“Saat ini, hasil diagnostik dari pengurutan genetik sangat rendah,” kata Paten. “Salah satu kemungkinan penyebabnya adalah metode pengurutan yang tidak lengkap yang digunakan dalam praktik klinis. Dalam penelitian ini, kami menguji hipotesis bahwa pengurutan jangka panjang yang baru dan lebih komprehensif dapat menghasilkan informasi tambahan yang berguna untuk diagnosis genetik.
“Kami sangat gembira menemukan banyak varian genetik tambahan dan sinyal epigenetik yang berpotensi menarik dalam kelompok kami. Meskipun ini masih tahap awal, informasi ini sangat menjanjikan, dan komunitas akan memerlukan waktu untuk menafsirkan dan memahami sepenuhnya sebagian besar dari hal ini. informasi baru.”
Menemukan penyakit langka
Penelitian ini berfokus pada penyakit monogenik langka, yaitu penyakit yang disebabkan oleh gangguan pada satu gen.
Para ilmuwan mendiagnosis penyakit genetik dengan menelusuri materi genetik mereka untuk menemukan varian—perbedaan dalam suatu gen yang mungkin mencegahnya berfungsi dengan baik. Pendekatan umum untuk menemukan varian ini menggunakan teknik yang disebut short-read sequencing, yang membaca pasangan basa genetik—kombinasi adenin (A), sitosin (C), guanin (G), dan timin (T)—dalam urutan sekitar 150–250 sekaligus.
Namun, keterbatasan dari pengurutan baca singkat adalah bahwa ia dapat melewatkan informasi penting di wilayah genom tertentu, seperti pola pasangan basa yang lebih panjang dari hanya 250 pasangan basa. Ia juga tidak bisa melakukan “pentahapan”, yaitu proses menentukan varian mana yang diwarisi dari ibu dan mana dari ayah.
Hal ini dapat membantu dokter menemukan dari siapa varian tersebut diwariskan; misalnya, jika dua varian diwarisi dari induk yang sama, satu varian dari masing-masing induk, atau tidak diwarisi sama sekali. Ini bisa menjadi informasi yang sangat berguna untuk diagnosis genetik, terutama bila data orang tua tidak tersedia.
Sebaliknya, pengurutan yang sudah lama dibaca dapat membaca DNA yang panjang sekaligus, menghilangkan kesenjangan yang mungkin menyebabkan para ilmuwan dan dokter kehilangan informasi penting tentang variasi gen. Pengurutan yang telah lama dibaca juga memberikan data pentahapan langsung serta informasi tentang metilasi, suatu proses kimia dalam DNA yang menyebabkan gen “dihidupkan atau dimatikan”, dan dapat berkontribusi terhadap penyakit.
“Pengurutan yang sudah lama dibaca akan jauh lebih baik dalam kasus-kasus tertentu, dan kami mengambil langkah-langkah untuk membuktikannya,” kata Negi.
Memimpin dalam metode
Para peneliti di UC Santa Cruz Genomics Institute memiliki sejarah panjang dalam inovasi dan keahlian dalam pengurutan yang telah lama dibaca dan secara aktif mengembangkan metode untuk mengoptimalkan pengurutan dan analisis untuk berbagai aplikasi penelitian kesehatan. Banyak teknik yang dikembangkan peneliti untuk mencapai prestasi, seperti genom referensi “telomer-ke-telomer” pertama yang benar-benar lengkap, kini digunakan untuk meningkatkan hasil pasien.
“Memperkuat temuan sebelumnya, kami menemukan bahwa manfaat penggunaan pengurutan yang sudah lama dibaca meningkat secara substansial dengan menggunakan genom referensi lengkap yang disebut 'telomer-ke-telomer' sebagai pengganti referensi genom yang tidak lengkap namun banyak digunakan,” Miga dikatakan.
“Kami mengantisipasi bahwa pangenom—referensi yang mewakili beragam variasi manusia—akan mendapatkan lebih banyak manfaat dari teknologi pengurutan baru yang telah lama dibaca.”
Laboratorium Paten dan Miga bermitra dengan dokter untuk menangani kasus 42 pasien dengan penyakit langka—beberapa di antaranya menerima diagnosis melalui metode pembacaan singkat atau pengujian khusus lainnya, dan beberapa di antaranya masih belum terdiagnosis. Dalam beberapa kasus, para peneliti memiliki akses terhadap informasi genetik orang tua, namun pada kasus lain, mereka tidak memilikinya.
Pengurutan pasien dengan pembacaan jangka panjang dipimpin oleh Lab Miga menggunakan pengurutan nanopore, sebuah metode pengurutan pembacaan panjang yang dirintis di UCSC, untuk mencapai pembacaan genom pasien yang sangat akurat dan menyeluruh dengan biaya sekitar $1.000 per sampel.
Data genom dianalisis menggunakan metode komputasi yang dikembangkan di laboratorium Paten untuk menemukan varian kecil dan besar, data pentahapan, dan data metilasi, semuanya menggunakan satu jalur pipa yang disebut pipa Napu. Proses analisis memakan waktu sekitar satu hari atau kurang, tergantung pada kecepatan pemrosesan komputer, dan biayanya $100.
Memecahkan kasus
Setelah mengurutkan dan menganalisis data pasien, para peneliti menemukan bahwa pembacaan panjang memberikan kumpulan data yang lebih lengkap dibandingkan dengan apa yang dapat diperoleh dengan pengurutan pembacaan pendek.
Pengurutan jangka panjang memberikan diagnosis yang meyakinkan untuk 11 dari 42 pasien dalam kohort, memberikan segala sesuatu yang diketahui dari data pembacaan singkat serta informasi tambahan, termasuk varian kandidat langka tambahan, pentahapan jangka panjang, dan metilasi—semuanya masuk protokol tunggal, hemat biaya, dan cepat.
Sebelas kasus yang didiagnosis termasuk empat kasus hipoplasia adrenal kongenital (suatu kondisi langka dimana kelenjar adrenal membesar dan gagal berfungsi dengan baik). Gen yang bertanggung jawab atas penyakit ini berada pada wilayah genom yang sangat menantang—gen ini tidak dapat dikarakterisasi dengan teknologi pengurutan baca singkat, dan uji klinis saat ini rumit dan tidak lengkap.
“Untuk mengatasi kasus-kasus ini, kami mengembangkan alat pangenomik baru yang mengintegrasikan kumpulan baru berkualitas tinggi seperti genom referensi 'telomer-ke-telomer',” kata Monlong, yang memulai proyek ini sebagai sarjana pascadoktoral di laboratorium Paten dan melanjutkan penelitiannya. posisi saat ini di INSERM di Perancis.
“Kami sangat senang melihat bahwa kami dapat menemukan dan menentukan fase varian patogen dari keempat pasien yang menderita penyakit ini dalam kohort kami. Di masa depan, hal ini mungkin menawarkan uji klinis yang cepat dan komprehensif. Kami tahu banyak penyakit langka yang melibatkan wilayah di seluruh dunia. genom manusia yang secara historis sulit untuk dipelajari, sehingga hasil penelitian kami mendorong kami untuk memperluas pendekatan kami terhadap lebih banyak penyakit yang telah terhenti sejak lama.”
Selain itu, dua kasus melibatkan gangguan perkembangan seksual, sementara satu kasus hipoplasia sel Leydig yang jarang terjadi memengaruhi perkembangan seksual pria karena sel Leydig yang kurang berkembang di testis. Selain itu, empat kasus gangguan perkembangan saraf, yang masing-masing mewakili perjalanan diagnostik yang panjang dan menantang, akhirnya terselesaikan.
“Urutan yang dibaca dalam waktu lama kemungkinan merupakan tes terbaik berikutnya untuk kasus-kasus yang belum terpecahkan, baik dengan varian yang menarik dalam satu gen atau fenotip yang jelas,” kata Negi. “Ini dapat berfungsi sebagai tes diagnostik tunggal, mengurangi kebutuhan akan beberapa kunjungan klinis dan mengubah perjalanan diagnostik selama bertahun-tahun menjadi hanya dalam hitungan jam.”
Rata-rata, setiap pasien memiliki 280 gen (termasuk beberapa gen penyakit Mendel, yang terkait dengan kelainan bawaan yang disebabkan oleh mutasi gen tunggal) dengan wilayah pengkode protein signifikan yang secara unik tercakup dalam pembacaan panjang dan tidak terdeteksi oleh pembacaan singkat.
“Masih banyak lagi genom yang bisa terungkap melalui pembacaan jangka panjang,” kata Negi. Namun, akan memakan waktu hingga kami dapat sepenuhnya menafsirkan informasi baru yang terungkap dari pembacaan jangka panjang. Data ini tidak ada dalam database klinis kami, yang dibangun menggunakan analisis pembacaan singkat dan pemetaan ke referensi standar.
“Kami menunjukkan bahwa pembacaan panjang mengungkap sekitar 5,8% lebih banyak genom telomer-ke-telomer yang tidak dapat diakses oleh pembacaan pendek.”
Peneliti UC Santa Cruz lain yang terlibat dalam penelitian ini termasuk Brandy McNulty, Ivo Violich, Joshua Gardner, Todd Hillaker, dan Sara O'Rourke.
Informasi lebih lanjut: Memajukan perakitan genom nanopori yang telah lama dibaca dan varian akurat yang memerlukan deteksi penyakit langka, The American Journal of Human Genetics (2025). DOI: 10.1016/j.ajhg.2025.01.002. www.cell.com/ajhg/fulltext/S0002-9297(25)00002-3
Disediakan oleh Universitas California – Santa Cruz
Kutipan: Urutan baca panjang mengungkap lebih banyak informasi genetik sekaligus memangkas waktu dan biaya diagnosis penyakit langka (2025, 24 Januari) diambil 24 Januari 2025 dari https://medicalxpress.com/news/2025-01-sequencing-reveals-genetic-rare -penyakit.html
Dokumen ini memiliki hak cipta. Terlepas dari transaksi wajar untuk tujuan studi atau penelitian pribadi, tidak ada bagian yang boleh direproduksi tanpa izin tertulis. Konten disediakan untuk tujuan informasi saja.
Keluarga Bahagia
pekerjaan demi keluarga
ADVERTISEMENT:
Informasi mengenai KING SLOT, Segera Daftar Bersama king selot terbaik dan terpercaya no satu di Indonesia. Boleh mendaftar melalui sini king slot serta memberikan hasil kembali yang paling tinggi saat sekarang ini hanyalah king slot paling gacor, gilak dan gaco saat sekarang di Indonesia melalui program return tinggi di kingselot serta pg king slot
matahari88slot permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://matahari88slot.com/
mama88 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://mama88.asia/
loker88 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://loker88.biz/
line88 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://line88.social/
lelang88 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://lelang88.asia/
legend88 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://legend88.org/
laundry 88 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://laundry88.org/
laundry 88 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://laundry88.net/
kota88 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://kota88.asia/
kawat88 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://kawat88.net/
kakaotalk permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://kakaotalk.pro/
kaca88 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://kaca88.asia/
jualbeli88 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://jualbeli88.com/
indonesiafc88 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://indonesiafc88.com/
indofood88 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://indofood88.com/
guru88 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://guru88.asia/
grabpay88 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://grabpay88.org/
grab88 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://grab88.info/
gopay88 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://gopay88.info/
gold88 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://gold88.asia/
gofood88 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://gofood88.com/
gelas88 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://gelas88.info/
eth88 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://eth88.org/
emas88 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://emas88.biz/
blockchain88 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://blockchain88.net/
baik888 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://baik888.net/
bagus888 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://bagus888.info/
anorganik88 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://anorganik88.com/
panen96 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://panen96.net/
panen96 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://panen69.info/
panen96 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://panen69.asia/
selot permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://selot.info/
selot permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://selot.asia/
samsung88 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://samsung88.asia/
raksasa88 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://raksasa88.info/
iphone88 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://iphone88.asia/
gm88 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://gm88.news/
selot permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://selot.biz/
topdewa88 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://topdewa88.com/
ebook88 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://ebook88.org/
ebook88 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://ebook88.net/
sensor88 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://sensor88.asia/
mpo2288 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://mpo2288.net/
lembaga88 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://lembaga88.net/
inti88 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://inti88.biz/
dokumen88 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://dokumen88.com/
baik88 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://baik88.asia/
bagus888 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://bagus888.asia/
tiktok888 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://tiktok888.info/
registrasi88 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://registrasi88.net/
registrasi88 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://registrasi88.com/
pstmi88 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://pstmi88.com/
lionsclubs88 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://lionsclubs88.com/
kompas88 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://kompas88.asia/
jeruk333 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://jeruk333.com/
james88 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://james88.net/
fb888 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://fb888.site/
detik888 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://detik888.asia/
david88 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://david88.net/
danautoba88 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://danautoba88.com/
tebar88 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://tebar88.asia/
slotbom777 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://slotbom777.asia/
padi88 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://padi88.com/
padi77 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://padi77.asia/
muara88 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://muara88.asia/
muara77 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://muara77.asia/
maxwin777 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://maxwin777.asia/
bigpot888 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://bigpot888.org/
bigpot888 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://bigpot888.net/
sumo88 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://sumo88.net/
sumo77 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://sumo77.org/
sumo77 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://sumo77.net/
sjo88 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://sjo88.asia/
sjo77 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://sjo77.asia/
kudetabet88 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://kudetabet88.asia/
kudeta99 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://kudeta99.asia/
kudeta988 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://kudeta988.com/
kudeta88 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://kudeta88.asia/
fufufafa permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://fufufafa.org/
bahagia88 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://bahagia88.org/
bahagia77 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://bahagia77.club/
angin777 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://angin777.inf/
sunda88 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://sunda88.org/
slotcc88 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://slotcc88.com/
poskobet88 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://poskobet88.com/
nuri88 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://nuri88.asia/
janjiwin88 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://janjiwin88.com/
top99 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://top99.asia/
top888 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://top888.info/
terbaik99 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://terbaik99.com/
terbaik88 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://terbaik88.asia/
pornhub88 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://pornhub88.org/
pornhub88 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://pornhub88.com/
plastik88 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://plastik88.com/
partai88 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://partai88.asia/
panas88 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://panas88.info/
minimal88 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://minimal88.net/
minimal88 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://minimal88.com/
merk88 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://merk88.net/
merk88 permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://merk88.com/
slot demo gacor permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://kdwapp.com/
akun demo slot gacor permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://kdwapp.com/
akun slot demo gacor permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://kdwapp.com/
akun demo slot pragmatic permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://kdwapp.com/
akun slot demo pragmatic permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://kdwapp.com/
akun slot demo permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://kdwapp.com/
akun demo slot permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://kdwapp.com/
slot demo gacor
akun demo slot gacor
akun slot demo gacor
akun demo slot pragmatic
akun slot demo pragmatic
akun slot demo
akun demo slot
slot demo gacor permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://jebswagstore.com
akun demo slot gacor permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://jebswagstore.com
akun slot demo gacor permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://jebswagstore.com
akun demo slot pragmatic permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://jebswagstore.com
akun slot demo pragmatic permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://jebswagstore.com
akun slot demo permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://jebswagstore.com
akun demo slot permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://jebswagstore.com
slot demo gacor
akun demo slot gacor
akun slot demo gacor
akun demo slot pragmatic
akun slot demo pragmatic
akun slot demo
akun demo slot
slot demo gacor permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://demoslotgacor.pro
akun demo slot gacor permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://demoslotgacor.pro
akun slot demo gacor permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://demoslotgacor.pro
akun demo slot pragmatic permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://demoslotgacor.pro
akun slot demo pragmatic permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://demoslotgacor.pro
akun slot demo permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://demoslotgacor.pro
akun demo slot permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://demoslotgacor.pro
slot demo gacor
akun demo slot gacor
akun slot demo gacor
akun demo slot pragmatic
akun slot demo pragmatic
akun slot demo
akun demo slot
slot demo gacor permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://situsslotterbaru.net
akun demo slot gacor permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://situsslotterbaru.net
akun slot demo gacor permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://situsslotterbaru.net
akun demo slot pragmatic permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://situsslotterbaru.net
akun slot demo pragmatic permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://situsslotterbaru.net
akun slot demo permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://situsslotterbaru.net
akun demo slot permainan paling top dan garansi imbal balik hasil besar bersama https://situsslotterbaru.net
slot demo gacor
akun demo slot gacor
akun slot demo gacor
akun demo slot pragmatic
akun slot demo pragmatic
akun slot demo
akun demo slot
situs slot terbaru
slot terbaru
